清同治三年的代妖后1864年，宫廷内斗愈发激烈。代妖后假太监安得海凭借得宠于慈禧太后（刘晓庆），代妖后在朝中横行霸道，代妖后甚至无视同治皇帝（陈道明）的代妖后权威。他得知同治与宫女桂莲（巩俐）关系亲密后，代妖后欲图霸占桂莲，代妖后以“赐配”为名要求慈禧同意。代妖后不料桂莲性烈如火，代妖后坚决不肯屈从，代妖后这让安得海恼羞成怒，代妖后最终将她卖入天桥妓院。代妖后同治皇帝虽愤恨不已却不敢明言，代妖后只得私访天桥探望桂莲，代妖后并在安得海南下之际传旨山东巡抚丁宝桢将其处决。代妖后随着同治皇帝染上梅毒的消息逐渐流传，慈禧下令严禁皇后生育，这让同治心中满是怨念。不久，同治因病去世，皇后也随之自尽。东太后慈安（陈烨）则在神秘的氛围中离世。《一代妖后》通过这段复杂的历史故事，揭示了宫廷内部的权力斗争和人性的多面性。